Толщина гкл для стен: какой лучше использовать

Обшивка стен ГКЛ-листами

В последние десятилетия вместе с понятием «евроремонт» в нашу жизнь вошло большое количество новых строительных и отделочных материалов. Одним из них являются гипсокартонные листы. Несмотря на свою относительную новизну, гипсокартон для стен и потолков стал уже не просто очень популярен, а поистине незаменим. Долговечность эксплуатации стены из гипсокартона зависит от правильного выбора материала и соблюдения всех технологий монтажа листов ГВЛ на стену. В связи с этим необходимо подробнее рассмотреть, какой толщины гипсокартон лучше для стен и как крепить его правильно к несущим поверхностям.

Содержание

Преимущества и недостатки листов ГКЛ

Гипсокартонные (ГКЛ) и их разновидность – гипсоволокнистые (ГВЛ) листы сегодня занимают лидирующие позиции среди стеновых отделочных материалов. Их большая популярность объясняется целым рядом положительных качеств, выгодно отличающих гипсовые листы от прочих вариантов внутренней отделки.

1. Высокая технологичность и простота монтажа. Отделка стен ГВЛ своими руками доступна даже непрофессионалам, никогда прежде не занимавшимся отделочными работами. С его помощью можно не только произвести выравнивание стен, но и воплощать в жизнь самые смелые проекты интерьерного дизайна.
2. Лёгкость конструкции. Благодаря малой массе гипсовых листов, такая конструкция не оказывает излишнего давления на фундамент и межэтажные перекрытия.
3. Пожаробезопасность. Гипс является негорючим материалом, способным противостоять воздействию открытого огня. В связи с этим отделку гипсокартоном можно использовать для создания огнезащитных перегородок.
4. Экологичность материала. Поскольку ГКЛ не содержит в своём составе вредных для человека примесей, им можно обшивать стены в любых жилых помещениях, в том числе в спальнях и детских комнатах.

Среди минусов этого материала можно отметить:

1. Низкую прочность. Стену, обшитую гипсом нельзя использовать для подвешивания массивных предметов – книжных полок, навесных шкафов, плазменных панелей и т. д.
2. Боязнь сырости. Гипс отличается высокой гидрофобностью и под воздействием влаги размокает, теряя форму и жёсткость. В связи с этим, листы ГВЛ или ГКЛ нельзя использовать для наружных отделочных работ.

Из-за высоких показателей гигроскопичности и слабой устойчивости гипса к сырости, любые панели ГКЛ предназначаются исключительно для отделки внутренних помещений. Это касается даже так называемых влагостойких листов гипсокартона.

Виды и технические характеристики

Современной промышленностью выпускается несколько разновидностей гипсовых листов. Все они различаются своими эксплуатационно-техническими характеристиками. Чтобы правильно выбрать гипсокартон для того или иного помещения, следует подробнее ознакомиться с его свойствами.

Листы ГКЛ

Предназначение

• Стандартный гипсокартон, он же – базовый. Состоит из листа прессованного гипса, с обеих сторон оклеенного картоном, и обозначается аббревиатурой ГКЛ. Наиболее распространённый вид гипсокартонного листа, широко использующийся для отделки помещений с нормальным уровнем влажности.
• Влагостойкий гипсокартон (ГКЛВ) разработан для использования в помещениях, с повышенным уровнем влажности. Влагостойкий лист содержит в своём составе особые водоотталкивающие добавки, снижающие показатель его гигроскопичности. В связи с этим, листами ГКЛВ возможна обшивка ванных комнат, туалетов, кухонь.
• Огнестойкий лист – обозначение ГКЛО. Предназначается для отделки помещений с повышенной опасностью возникновения пожара. Благодаря обработке антипиренами, такие листы способны вдвое дольше противостоять воздействию открытого пламени.
• Огне- влагостойкий гипсокартон (ГКЛВО). Обладает целым комплексом улучшенных свойств – может использоваться как во влажных, так и огнеопасных помещениях. Например, возможна его установка в кухнях с газовыми плитами.

Гипсоволокнистый лист

Листы из гипсоволокна (ГВЛ) являются особой группой гипсового отделочного материала. Плиты ГВЛ изготавливаются из смеси гипса и целлюлозных волокон в соотношении 5 к 1. Отличительным качеством гипсоволоконных листов, по сравнению с ГКЛ, является их повышенная прочность. Благодаря этому к стене можно крепить достаточно тяжёлые подвесные конструкции.

Один саморез, закрученный в стену из ГВЛ, способен выдержать до 30 кг нагрузки.

Монтаж ГВЛ может производиться как на предварительно собранный каркас, так и непосредственно на выровненное несущее основание. В первом случае крепится ГВЛ на стену при помощи саморезов, а во втором – посредством строительных клеевых составов. Клей для ГВЛ может представлять собой либо силиконовый герметик, либо «жидкие гвозди», а к кирпичным и бетонным поверхностям листы можно также крепить при помощи плиточного клея на цементной или полимерной основе.

Размеры

Чтобы более полно ответить на вопрос, какой гипсокартон лучше использовать в том или ином случае, особое внимание следует уделить размерам листа. Стандартные габариты гипсокартона представлены в таблице.

Размеры плиты ГКЛ от различных производителей

Для оптимизации расходов материала желательно подбирать размер листа гипсокартона кратным длине и ширине обшиваемой поверхности. В этом случае количество нецелевых отходов будет минимизировано.

Толщина листа

Одним из важнейших показателей является толщина листа гипсокартона – от этого зависит область его применения и технологии монтажа. На современном рынке отделочных материалов представлен широчайший выбор гипсовых листов: минимальная толщина их составляет 6 мм, максимальная – до 50 мм. Первый, наиболее тонкий материал, предназначается для обшивки поверхностей с малыми внешними нагрузками – например, потолков.

Также тонкий лист отлично подходит для изготовления различных декоративных элементов интерьерного дизайна – арок, ниш, криволинейных конструкций. Это обусловлено его малой жёсткостью и способностью изгибаться, принимая нужную форму.

Декоративная арочная конструкция из ГКЛ

Наиболее массивные гипсовые плиты толщиной до 5 см используются для выравнивания полов в качестве основы для финишного напольного покрытия, требующего идеально ровной поверхности: ламината, линолеума, паркета. Толщина гипсокартона для стены выбирается в зависимости от её функционального предназначения.

В помещениях с повышенной вероятностью механического воздействия на стены (прихожие, лестничные клетки, детские комнаты), желательно использовать более толстые листы. Для декоративной отделки интерьеров гостиных или спален можно применить и более тонкие разновидности гипсокартона.

Наиболее востребованная толщина ГКЛ для стен – 12…15 мм, что позволяет наиболее оптимально использовать материал. Такой лист способен выдержать значительные физические нагрузки, удары и давление, при этом не утяжеляет конструкцию стен и имеет невысокую стоимость.

Для улучшения сопротивляемости стенового гипсокартона к внешним нагрузкам, используются также разные конструкционные решения при монтаже перегородок. Согласно положениям СНиП, в строительстве применяются следующие виды перегородок из ГКЛ или ГВЛ.

С-111

Однослойная стена тип С-111

Такая конструкция состоит из одинарного каркаса, обшитого в один слой с двух сторон гипсокартонными листами. Внутри стена может заполняться утеплителем или шумоизоляционными материалами, чаще всего – минеральной ватой или пенополистиролом. Толщина такой стены зависит от ширины каркасного профиля и толщины используемых листов ГКЛ. Масса 1 куб. м стены С-111 составляет порядка 25 – 30 кг.

С-112

Представляет собой стену из одинарного металлического каркаса и двухслойную обшивку с каждой стороны. Такая конструкция обладает повышенными звукоизоляционными свойствами, составляющими до 50 децибел. Кроме того, часто применяется для создания огнезащитных экранов для изоляции потенциально огнеопасных помещений. В этом случае каркас заполняется негорючим материалом и обшивается огнестойкими листами. Масса 1 кубометра – от 50 до 55 кг.

С-113

Такая стена предназначена для использования в отделке помещений с повышенной влажностью. Имеет одинарный каркас и обшивается тройным слоем влагостойкого гипсокартона. Для улучшения теплоизоляции и шумопоглощения, гипсокартон может использоваться в комплексе с наполнителем из минваты. Масса м³ стены составляет около 75 кг.

С-115

Для создания стены С-115 применяется двойной каркас, обшиваемый двумя слоями ГКЛ. Это повышает прочность перегородки, а в зависимости от марки применяемого листа гипсокартона – показатели огне- или влагостойкости. Как вариант стены С-115 – каждый слой двойного каркаса может быть разделён между собой дополнительным листом ГКЛ. Масса такой стены составляет от 55 до 70 кг/м³.

С- 116

Такая стена конструктивно схожа с типом С-115, но в отличие от него имеет внутри себя пространства для прокладки коммуникаций – электрической проводки, трубопроводов, вентиляционных коробов. От габаритов коммуникационных линий во многом зависит и толщина стены С-116. Масса кубометра С-116 может составлять до 60-65 кг, показатель шумопоглощения – до 50 децибел, сопротивление открытому огню в варианте обшивки ГКЛО – порядка 1,5 часов.

С-118

Стена повышенного класса устойчивости к механическому воздействию, предназначенная для предотвращения несанкционированного проникновения в помещение. Состоит из одинарного каркаса, по типу стен С-111…С-113, обшитого тремя слоями ГКЛ. Для усиления прочности между каждым из слоев гипсокартона вставляется лист оцинкованной стали. Одновременно это повышает сопротивляемость стены открытому пламени и влажности.

Ознакомившись с основными эксплуатационно-техническими характеристиками листов ГКЛ, можно представить, какой гипсокартон лучше использовать в том или ином случае. Также, исходя из предназначения помещения, можно выбрать наиболее подходящий тип конструкции стены.

ГВЛВ – технические характеристики и применение материала

Обновлено: 08.01.2020

Владислав Яковлев
6 мин.

Влагостойкие гипсоволокнистые листы это экологически чистый, дышащий материал. Высокие технические характеристики делают область его применения достаточно обширной. ГВЛВ используется в декоративных целях, для облицовки пола и стен, при создании защитных конструкций, разрешен в больничных и детских учреждениях.

Гипсоволокнистые плиты 10 мм

Содержание статьи

• Что это такое
• Технические характеристики листа ГВЛВ 10 мм
• Применение
• Как правильно подобрать качественные гипсоволокнистые листы для стен и пола
• Технология укладки

Что это такое

Внешне ГВЛ путают иногда с гипсокартоном – это прямоугольная облицовочная плита, изготавливается из гипсовой основы с добавлением присадок. Главные отличительные характеристики это отсутствие внешних оболочек и содержание в составе распушенной целлюлозы, которая выполняет роль армирующей сетки. Растительная целлюлоза обрабатывается специальными веществами, которые обеспечивают равномерное распределение волокна.

Благодаря применению целлюлозы гипсоволокнистые плиты в разы прочнее того же гипсокартона, а содержание в составе дополнительных реагентов дает материалу огне- и влагоустойчивость.

Применяется в противопожарных конструкциях

Технические характеристики листа ГВЛВ 10 мм

В гипсоволокнистые листы можно вкручивать шурупы и вбивать гвозди – они не крошатся, ведь прочность материала 1250 кг/м³. Другие сильные стороны:

• Обработка антимелениевыми средствами и шлифовка дают дополнительную защиту от влаги. При этом материал гигроскопичен, что позволяет регулировать влажность в помещении. Если воздух сухой, то лист отдает влагу, и наоборот. В любом случае после установки нужна обработка грунтовочными составами;
• Обладает морозостойкостью –  выдерживает 15 циклов заморозки и оттаивания;
• Прочность на изгиб выше, чем у гипсокартона;
• Материал легко обрабатывать – для этого годится любой инструмент по дереву.

Обрабатывается так же, как и ГКЛ

• Низкая теплопроводность и устойчивость к огню – материал применяют как противопожарную защиту и дополнительную термоизоляцию;
• Маленькая масса листов не создает чрезмерных нагрузок для несущих стен. Стандартный вес плит – 39-43 кг;
• Дополнительная звукоизоляция.

👷‍♂️ Не менее важная информация по теме: Гипсоволокно Кнауф — ГВЛВ 1200х2500 10мм

Применение

Хорошо подойдет для облицовки стен помещений любого типа. ГВЛВ полотно 10 мм имеет отличные технические характеристики, применяют его в следующих случаях:

• Для работ в нежилых помещениях – подвалах, чердаках. Гипсоволокнистый лист 10 мм можно применять там, где нет системы отопления, и не исключается промерзание стен. Разрешается использование гипсовых штукатурок или на основе искусственной смолы.
• Для выравнивания напольных покрытий. Монтаж листа ГВЛ 10 мм – быстрый и легкий процесс, что делает его конкурентом технологии сухих полов от Кнауф и классическим решениям.

Лист ГВЛ белого оттенка, толщина 10 мм, вес 40 кг

• Плиты ГВЛВ применяют для отделки стен ванной, санузла или кухни. Использование гипсоволокнистого влагостойкого листа, толщина которого всего 10 мм позволит регулировать влажность в этих помещениях. Характеристики материала улучшатся, если поверхность полотна обработать различными гидрофобными растворами. Если же на ГВЛ планируется поклейка обоев, то листы предварительно покрывают клеевым раствором.
• Прочность позволяет материалу выдержать высокую локальную нагрузку, не теряя своих качеств, что делает возможным использование ГВЛ в работах по первичному обустройству спортзалов и иных тренировочных помещений. Листы разрешается окрашивать, но при этом важно их прогрунтовать и применять дисперсионные составы на основе масла, лака или эпоксида. Не рекомендуется приобретать краски с добавлением элементов жидкого стекла и щелочных компонентов
• Полотна 10 мм используют для облицовки пассажирских и грузовых лифтов в шахтах, для обшивки котельных и щитовых комнат. В случае возникновения пожара их структура не разрушается, а наоборот – сдерживает пламя.

Ровная и прочная поверхность

Как правильно подобрать качественные гипсоволокнистые листы для стен и пола

Все зависит от цели, для которой вы приобретаете ГВЛ. Если это сухая стяжка, выбирайте малоформатные листы 1,5 х 1 м, толщиной 10 мм. Кроме этого продаются утолщенные (12 мм) или уменьшенные (1,2 м) листы.

Технология сухого пола предполагает укладку в два слоя, поэтому площадь тоже умножают на 2.

Кроме деления по обычному применению – для стен и пола, гипсоволокнистые плиты выпускаются невлагостойкие и влагостойкие. Последние пропитаны влагоотталкивающим раствором.

Большую роль при выборе играет используемый теплоизолятор – пенополистирол, минвата или что-то другое.

В любом случае бетонное перекрытие изолируют от влаги полиэтиленом или бумагой с пропитками. Если этого не сделать, то намокание теплоизолятора неизбежно.

Укладка пароизоляции

Обращайте внимание на маркировку – она наносится на каждый лист. Производитель обязан предоставить продавцу сертификат качества.

Обязательно осмотрите продукцию, удкляя внимание поверхности – она должна быть ровной, без трещин, царапин и прочих дефектов. Важно знать, что если материалы на складе хранились при высоком уровне влаги в помещении, то в дальнейшем это может привести к порче.

Технология укладки

Если помещение оснащено хорошей системой вентиляции, то лист (вес от 40 до 42 кг) укладывают даже на стяжку из бетона. Для этого специалисты рекомендуют выбирать плиты средних размеров.

Лист, масса которого 40 кг, подойдет для укладки на деревянную или железобетонную поверхность.

Основные этапы монтажа

Укладка проводится, по следующей схеме:

• Пол тщательно вычищается от мусора и пыли. Если есть трещины или подобные дефекты, то они заделываются.
• Настилается полиэтилен, который защищает укладываемый пол от влаги.
• Кромочная лента, которая выполняет роль звукопоглотителя, выкладывается по периметру комнаты. Лентой обклеивают колонны и подобные примыкающие к полу детали интерьера.
• Выставляются маяки высот, по которым расположат направляющие.
• Укладывают и выравнивают сами направляющие – они позволят точно разровнять слой изоляции.
• Засыпают керамзит. Его утрамбовывают и выравнивают по заранее установленным направляющим.

• Далее укладывают ГВЛВ (масса которых не более 40 кг) начиная от углов помещения.
• После того как первые плиты уложены, их фиксируют клеевым раствором или мастикой. Сверху накладывают еще один слой плит, вес которых не превышает 40 кг.
• Слои соединяют между собой при помощи шурупов.
• Когда основные укладочные работы завершены, пол прогрунтовывают, монтируют внешнее покрытие.

Лист ГВЛВ (масса – от 39 до 43 кг) – это новинка в сфере ремонта, которая разработана как альтернатива гипсокартону, но без его слабых сторон. Армирование распушенной целлюлозой повышает технические характеристики материала и делает его применение для облицовки пола или стен более предпочтительным.

Измерение толщины покрытия на бетонных и кирпичных основаниях | Ресурсы

Ультразвуковой толщиномер покрытий DeFelsko PosiTector 200 идеально подходит для неразрушающего измерения толщины лакокрасочных покрытий на бетонных и кирпичных основаниях. Это устраняет необходимость ремонта покрытия после осмотра, экономя время как инспектора, так и подрядчика.

Почему важно измерять толщину покрытия на бетонных и кирпичных основаниях?

Основания для каменной кладки включают камень, кирпич, плитку, монолитный бетон, сборный железобетон, бетонные блоки, асбестоцементные плиты, штукатурку и гипсокартон. Кладочные подложки часто бывают пористыми с различной степенью профиля поверхности. Хотя такая пористость и шероховатость полезны для повышения адгезии покрытия, они усложняют получение воспроизводимых измерений толщины.

Краски и покрытия для каменной кладки используются для множества целей, включая косметический внешний вид, долговечность, стойкость к истиранию, а также защиту от таких элементов, как влага, соль, химическое и ультрафиолетовое излучение. Обычные покрытия для бетона включают латексные краски, акриловые краски, лаки, уретаны, эпоксидные и полиэфирные смолы.

Слои грунтовки используются в качестве усилителей адгезии, а слои верхнего покрытия служат для защиты от окружающих элементов. Возможности PosiTector 200  различение отдельных слоев краски зависит от акустических свойств соседних слоев, толщины отдельных слоев, а также от самого процесса нанесения покрытия.

Основной целью измерения толщины покрытия на бетоне является контроль затрат на покрытие при обеспечении достаточного защитного покрытия. Коммерческие контракты часто требуют независимой проверки работы после ее завершения.

Метод неразрушающего контроля устраняет необходимость ремонта системы окраски и покрытия после осмотра, экономя время как инспектора, так и подрядчика.

Проблемы измерения покрытий на бетоне

Традиционно метод разрушающих испытаний использовался для определения толщины краски на каменных подложках, таких как бетон. Покрытия, используемые на бетоне, варьируются от твердых до мягких, от гладких до текстурированных и охватывают широкий диапазон толщины. Поверхность бетона может быть довольно шероховатой, что может привести к значительным отклонениям в измерении толщины.

Измерительное решение DeFelsko

Ультразвуковой толщиномер PosiTector 200 C (стандартный или расширенный) идеально подходит для измерения большинства красок и покрытий на бетонных покрытиях. Этот толщиномер с диапазоном измерения толщины краски от 50 до 3800 мкм (от 2 до 150 мил) рекомендуется клиентам, которым требуется единое решение для неразрушающего измерения для большинства областей применения. PosiTector 200 C  для большинства применений требуется небольшая регулировка калибровки или она вообще не требуется. На рис. 1 показано поперечное сечение репрезентативного покрытия толщиной от 125 до 375 мкм (от 5 до 15 мил) на бетоне с крупным заполнителем, которое идеально подходит для PosiTector 200 C .

Ультразвуковой измеритель PosiTector 200 B идеально подходит для измерения толщины покрытия от 13 до 1000 мкм (от 0,5 до 40 мил). Хотя он и не предназначен специально для измерения покрытий на бетоне, после простой настройки калибровки зонд «В» может продемонстрировать улучшенную воспроизводимость при измерении твердых, тонких покрытий на гладких поверхностях. На рис. 2 показано приложение, в котором PosiTector 200 B может быть предпочтительнее.

Если бетонная поверхность гладкая, но неровная, или шероховатая и пористая, можно ожидать, что значения измерений будут соответственно различаться. При осмотре под увеличением места, где покрытие затекало в поры или щели, могут выглядеть как выбросы при проведении измерений. Например, на рисунке 3 выпуклость на подложке в точке «А» приводит к значительному изменению толщины по сравнению с соседней точкой «В». Пользователь может сравнить результаты со спецификацией или ожидаемой толщиной покрытия при анализе результатов. Некоторые результаты, возможно, придется опустить при расчетах.

Для применения, подобного рисунку 4, которое имеет как шероховатую подложку, так и шероховатую поверхность покрытия, может потребоваться снять несколько показаний на отдельных небольших участках, рассчитать средние показания, а затем сравнить эти значения. Затем эти средние значения можно сравнить со спецификацией толщины покрытия. Разрушающие испытания образца, показанного на рис. 4, выявили отклонение от 1 до 3 мм (от 40 до 115 мил) в пределах области диаметром ¼ дюйма.

Рисунок 1: Покрытие на шероховатый бетон с крупным заполнителем Рисунок 2: Тонкое покрытие на гладкой цементной поверхности Рисунок 3: Толстое мягкое покрытие на бетоне Рисунок 4: Покрытие на шероховатом легком бетоне

Как измерить покрытие на бетоне с помощью PosiTector 200

Ультразвуковое измерение работает, посылая ультразвуковые колебания в покрытие с помощью зонда (т.е. преобразователя) с помощью контактной жидкости, нанесенной на поверхность. К каждому инструменту прилагается бутылка на 4 унции обычного гликолевого геля на водной основе. В качестве альтернативы капля воды может служить контактной жидкостью на гладких горизонтальных поверхностях.

Рисунок 5 : Проведение измерения

После того, как капля контактной жидкости была нанесена на поверхность детали с покрытием, датчик помещается на поверхность плоской поверхностью. Нажатие вниз запускает измерение (см. рис. 5). Поднятие зонда, когда раздастся двойной звуковой сигнал, сохранит последнее измерение на ЖК-дисплее. Второе показание можно снять в том же месте, продолжая удерживать датчик на поверхности. Когда закончите, протрите датчик и поверхность начисто салфеткой или мягкой тканью.

Использование графического режима PosiTector 200

PosiTector 200 (только модели Advanced) может отображать графическое представление ультразвукового импульса, когда он проходит через систему покрытия. Этот мощный инструмент позволяет пользователю лучше понять, что датчик «видит» под поверхностью покрытия.

Рисунки 6 и 7:
Слева: PosiTector 200 C3 с включенным графическим режимом
Справа: PosiTector 200 C3 с включенным режимом памяти

Лучший ультразвуковой толщиномер покрытия для бетонных и кирпичных оснований

Ультразвуковой толщиномер PosiTector 200 компании DeFelsko идеально подходит для измерения толщины лакокрасочного покрытия на различных неметаллических подложках.

Для каменных покрытий идеально подходят две модели:

1. PosiTector 200 C1 — это экономичное и наиболее распространенное решение для измерения ОБЩЕЙ толщины покрытия.
2. PosiTector 200 C3 способен измерять как ОБЩУЮ толщину покрытия, так и толщину до 3 отдельных слоев в многослойной системе. Он также имеет графическое отображение для подробного анализа системы покрытия.

Каждый PosiTector 200 поставляется в комплекте с корпусом датчика PosiTector, зондом 200 C, контактной жидкостью (ультразвуковой гель), пластиковыми прокладками или блоком, защитным резиновым чехлом, ремешком для запястья, 3 щелочными батареями AAA, инструкциями, защитным экраном для линз, удобной переноской. футляр, подробный сертификат калибровки, соответствующий NIST или PTB, USB-кабель, программное обеспечение PosiSoft, гарантия два (2) года.

Размер: 127 x 66 x 25,4 мм (5,75″ x 2,5″ x 1,2″) Вес: 137 г (4,9унций) без батарей

Соответствует  ASTM D6132 и ISO 2808

*Размер и вес указаны только для корпуса датчика PosiTector и не включают датчик.

Бесплатная консультация

Чтобы узнать текущие цены или заказать эти инструменты, посетите нашу страницу продаж. Если вам нужна дополнительная техническая информация или у вас есть вопросы, относящиеся к вашему конкретному приложению, мы рекомендуем вам воспользоваться нашим многолетним опытом, чтобы порекомендовать лучший измеритель для ваших нужд.

Свяжитесь с [email protected], чтобы задать конкретные вопросы или запросить дополнительную информацию.

Простой рецепт геля SDS-PAGE и 10-шаговый протокол

SDS-PAGE (что означает электрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия) — это метод, который объединяет ученых-биологов. Мы все делаем это во время наших исследований, чтобы разделить аналиты белка, и, следовательно, нам всем нужен хороший рецепт геля SDS-PAGE.

На сайте Bitesize Bio есть отличные статьи, в которых рассказывается, как работает SDS-PAGE и что делают компоненты буфера Лэммли. Есть также один, который объясняет, следует ли использовать постоянный ток или напряжение при работе с гелями SDS-PAGE.

А как насчет рецепта геля SDS-PAGE для отливки собственных гелей?

Что ж, больше не полагайтесь на этот потрепанный, неразборчивый (и, возможно, неверный) лист, который приклеен скотчем к стене вашей лаборатории, поскольку мы предоставили вам простой рецепт приготовления гелей SDS-PAGE с любым желаемым процентным содержанием.

Мы также кратко рассмотрим химию ингредиентов геля SDS-PAGE и закончим удобным руководством по устранению неполадок, когда что-то пойдет не так.

Ваш рецепт геля SDS-PAGE

Для тех, кто не в курсе, гели SDS-PAGE готовят при определенном процентном содержании акриламида для разделения аналитов с заданной молекулярной массой.

И когда мы говорим «акриламид», мы используем его для обозначения 30% по весу (что означает вес по весу) раствора акриламида и бис-акриламида в соотношении (обычно) 37,5:1.

И после этого ознакомьтесь с таблицей 1 для таблицы рецептов гелей SDS-PAGE для 4 гелей толщиной 0,75 мм.

Таблица 1 . Рецепт геля SDS-PAGE.

66666696666666966669666666666666666666666

696669666696669.

6666666666696696669.0003

Если вы хотите приготовить 4 геля толщиной 1,00 мм, умножьте все в рецепте SDS-PAGE на 1,5.

Если вы хотите приготовить 4 геля толщиной 1,50 мм, умножьте все в рецепте SDS-PAGE на 2,0.

Профессиональный наконечник ! Если вы не можете понять, куда загружать образцы после того, как гель находится в резервуаре для геля, добавьте ~0,003% вес./об. бромфенолового синего в укладочный гель, чтобы придать ему голубой оттенок.

Помогите! Я не знаю, какое процентное содержание гелей нужно приготовить

Окончательное процентное содержание акриламида определяет, с какой молекулярной массой аналиты будут способны разделять ваши гели.

И если у вас нет большого опыта работы с гелями SDS-PAGE, вы можете не знать, какое процентное содержание геля подходит для вашего целевого аналита(ов). Используйте Таблицу 2 в качестве руководства. [2]

Таблица 2 . Краткая информация о размерах белков, которые могут разрешить гели SDS-PAGE при приготовлении с 8–20% акриламида.

. Факт. составляет ~22% (приготовление гелей без воды).

Для разделения аналитов с чрезвычайно высокой или низкой молекулярной массой вы можете использовать порошкообразный акриламид и бис-акриламид.

Это позволяет настроить соотношение двух компонентов и отлить гели с соответствующей разрешающей способностью. Мы не будем углубляться в это, за исключением того, что вы можете купить порошкообразный акриламид и бис-акриламид отдельно или предварительно смешанные.

Однако в большинстве случаев подходят 8–20% гели.

Протокол литья геля SDS-PAGE

Дырявые лунки, шаткие гели. Теперь у вас есть рецепт геля SDS-PAGE, содержащий все ингредиенты и их необходимые пропорции, но как надежно отливать гели?

Вот простой 10-этапный протокол литья геля, который никогда не подведет.

10 простых шагов для приготовления идеального геля SDS-PAGE

1. Соберите все необходимое оборудование для литья и две емкости подходящего размера, например, два стакана на 50 мл, для приготовления разделяющих и штабелируемых гелей. Пометьте их чем-нибудь осмысленным, например, «R» и «S», чтобы не перепутать их.
2. Протрите стеклянные пластины для сэндвичей раствором промышленного метилового спирта (IMS) или этанола, чтобы очистить их. Соберите литейное оборудование так, чтобы тонкая стеклянная пластина находилась спереди, толстая стеклянная пластина с ребрами — сзади, а ребра образовывали узкий зазор между двумя пластинами. Сюда вы будете наливать смесь геля.
3. Высыпьте все ингредиенты для обоих гелей, , кроме 10% APS и TEMED, в соответствующие емкости. APS и TEMED на данном этапе не учитываются, потому что полимеризация начинается в момент их добавления! Запечатайте емкость, содержащую ингредиенты геля для укладки, чтобы предотвратить испарение.
4. Добавьте 10% APS, а затем TEMED к компонентам растворяющего геля и осторожно перемешайте. Немедленно налейте смесь в стеклянные пластины для сэндвичей, оставив примерно 2,5 см между мениском и верхней частью передней пластины для размещения разрешающего геля и гребенки для образцов. Если вы не знаете, сколько места оставить, вставьте расческу в пустой набор пластин и нарисуйте линию!
5. Добавьте изопропанол (не смешивается с ингредиентами геля) поверх неполимеризованного разделяющего геля. Подождите 30–45 минут, пока гель полимеризуется. Вы можете проверить, полимеризовался ли гель, осторожно наклонив литейное оборудование. Если гель не полимеризовался, верхняя часть рассасывающего геля останется параллельно земле.
6. Слейте изопропанол и удалите излишки бумажной салфеткой. Промойте дистиллированной водой, чтобы удалить остатки изопропанола.
7. Добавьте 10% APS и TEMED к ингредиентам концентрирующего геля, перемешайте и сразу же вылейте поверх разделяющего геля. Для простоты заполните стеклянные пластины для сэндвичей доверху.
8. Вставьте расческу в неполимеризованный укладочный гель и дайте ему застыть. Гребень вытеснит часть неполимеризованного укладочного геля, который выльется наружу. Протрите его салфеткой.
9. Аккуратно снимите гребень по вертикальной линии. Это должно предотвратить волнистость и обрушение колодцев. Обратите внимание, что концевые колодцы могут сломаться при использовании старых и невзрачных гребней.
10. Используйте сразу или храните правильно (см. ниже) для последующего использования.

Несколько дополнительных указателей сделают вашу жизнь намного проще.

Пластиковая пипетка Пастера хорошо подходит для заливки гелей и дает вам возможность точно контролировать добавляемые объемы. Также хорошо работает серологическая пипетка.

Стремитесь к тому, чтобы расстояние между верхней частью разделяющего геля и нижней частью лунок для проб, образованных гребенкой, составляло примерно 10 мм. Это даст вам наилучшее разрешение между вашими анализируемыми белками.

При удалении изопропанола лучше использовать безворсовую салфетку, а не синий валик. Фильтровальная бумага, используемая для вестерн-блоттинга, также хорошо работает.

А если вам интересно, использовать ли гребни с 5, 10 или 15 зубьями, в Таблице 3 приведены приблизительные объемы образцов, которые полученные гели могут разместиться на лунку.

Таблица 3 . Сводка объемов образцов, которые могут вместить гели толщиной 0,75, 1,00 и 1,50 мм при использовании 5-, 10- и 15-зубчатых гребенок.

, если вы удивляетесь, что у него есть gel, gel hare here ars, gel, gel hare hare hare hare hare hare hare ars.

В большинстве случаев подходят гели толщиной 0,75 мм.

Как хранить гели SDS-PAGE

Смочите папиросную бумагу под краном и оберните ею гели. Затем отожмите лишнюю воду и заверните всю упаковку в пищевую пленку.

Промаркируйте упаковки с указанием процентного содержания и толщины геля, поместите их в холодильник и используйте в течение нескольких недель.

Зачем отливать собственные гели SDS-PAGE?

Если вы прочитали рецепт геля SDS-PAGE выше и подумали: «Зачем мне все это, когда я могу купить готовые гели?» Я слышу тебя.

Но есть веские причины для того, чтобы отливать свои собственные гели:

1. Вы сэкономите деньги;
2. Вы сократите количество пластиковых отходов;
3. Вы никогда не иссякнете;
4. У вас всегда будет под рукой нужный процентный гель. Даже градиентные гели!

Что касается пункта 1, то самым дорогим ингредиентом геля SDS-PAGE является 30% раствор акриламида. Стоит примерно 70-100 фунтов стерлингов за 0,5 л.

Быстро считать!

Используя приведенную выше таблицу рецептов, если бы вы готовили исключительно 10% акриламидные гели, вам потребовалось бы ~7 мл 30% акриламида на 4 геля SDS-PAGE.

Таким образом, 0,5-литровая бутылка 30% акриламида дает 4 x (500/7) = 285 лари. Это 0,25-35 фунтов стерлингов за гель.

Самые дешевые сборные гели, которые я смог найти (хотя и после очень беглого просмотра), стоили около 7 фунтов стерлингов за гель.

Не нужно быть сэром Роджером Пенроузом, чтобы понять, какой вариант самый дешевый.

Я понимаю, что другие ингредиенты в рецепте геля SDS-PAGE также имеют стоимость, связанную с ними. Я предполагаю, однако, что эти ингредиенты уже доступны в вашей лаборатории!

Познакомьтесь с актерами: что делают компоненты гелей SDS-PAGE

Вы когда-нибудь задумывались, что на самом деле делают ингредиенты в вашем рецепте геля SDS-PAGE?

Трис-основание при pH 6,8 в стопинг-геле и SDS выполняют те же функции, что и в буфере Лэммли.

Причина появления триса при pH 8,8 в разделяющем геле:

1. При pH 6,8 глицин (из рабочего буфера) находится вблизи своей изоэлектрической точки 6,08, что означает, что он отрицательно заряжен лишь часть времени. Из-за этого он перемещается за белковыми аналитами в концентрирующем геле.
2. Анионы Cl ^– заряжены отрицательно при обоих значениях pH 6,8 и 8.8. Из-за этого они перемещаются перед анализируемыми белками в концентрирующем геле.

Итак, в стопочном геле с pH 6,8 белки зажаты между глицином сзади и Cl ^– спереди.

Но когда глицин попадает в растворяющий гель с pH 8,8, он полностью депротонируется, превращаясь в анион глицината.

Слишком маленький, чтобы ему мешала пористость геля, глицинат перемещается перед анализируемым белком. Таким образом, все аналиты осаждаются в разделяющем геле вместе. Это способствует максимальному разрешению аналита.

Отсюда и название — укладочный гель.

Глицинат и Cl ^– тем временем летят к положительному электроду (аноду), оставляя сравнительно массивные белковые аналиты пробиваться сквозь матрицу полиакриламидного геля.

Отсюда и название — рассасывающий гель.

Структуру остальных ингредиентов смотрите на Рисунке 1. Он должен помочь вам понять описание их основного химического состава и функций, приведенное ниже.

Рисунок 1 . Структуры ключевых химических веществ в рецепте геля SDS-PAGE. (Изображение предоставлено Томасом Уорвиком.)

1. Акриламид

Зачем он нам нужен?

Как уже упоминалось, термин «акриламид» означает смесь акриламида и бис-акриламида. Это основные строительные блоки геля.

Как это работает?

Акриламид содержит концевую алкеновую связь, подверженную радикальной полимеризации.

Неспаренный электрон сульфатного свободного радикала атакует и разрывает пи-связь алкена в молекуле акриламида. Это оставляет сульфатную группу ковалентно связанной с концевым углеродом молекулы акриламида одинарной связью и неспаренным электроном на соседнем углероде.

Таким образом, вся молекула, образующаяся в результате этой реакции, представляет собой свободный радикал.

Этот свободный радикал затем разрывает пи-связи алкена на других молекулах акриламида. Результатом этого являются все более длинные полиакриламидные свободные радикалы.

Они атакуют большее количество акриламидных алкенов и т. д., и цикл повторяется в процессе, называемом «продолжение цепи». Эта реакция показана на рисунке 2.

Рисунок 2 . Развитие цепи при радикальной полимеризации акриламида/бис-акриламида в процессе приготовления геля SDS-PAGE. (Изображение предоставлено Томасом Уорвиком.)

Между тем, бис-акриламид представляет собой по существу две молекулы акриламида, соединенные метиленовым (-CH ₂ ) мостиком между двумя атомами азота амида. Из-за этого две алкеновые связи фактически направлены наружу, и обе подвержены радикальной полимеризации.

Итак, молекулы бис-акриламида образуют поперечные связи между возникающими полиакриламидными цепями.

Таким образом, соотношение акриламида к бис-акриламиду имеет решающее значение для пористости геля, а также для 0495 концентрация этих двух реагентов.

Уведомление о безопасности

Акриламид является нейротоксином! Так что не нюхайте его и не закрывайте бутылку крышкой во время работы. Еще лучше, пипетируйте его в вытяжном шкафу, если у вас есть к нему легкий доступ.

2. APS

Зачем нам это нужно?

Персульфат аммония (APS) является источником сульфатных свободных радикалов, необходимых для инициирования полимеризации акриламида и бис-акриламида.

Как это работает?

Персульфат аммония представляет собой аммониевую соль аниона персульфата.

Анион персульфата представляет собой (по существу) два аниона сульфата, соединенных вместе связью O–O (пероксид). Эта связь относительно слаба и в присутствии TEMED разрывается с образованием сульфатного свободного радикала.

3. TEMED

Зачем нам это нужно?

N,N,N´,N´-тетраметилэтилендиамин (TEMED) катализирует образование сульфатных свободных радикалов. Без него они не образуются.

Как это работает?

Хорошо, реакция между TEMED и APS довольно сложна и включает переходное состояние — ура! Но короткая версия такова:

Молекула TEMED содержит два атома N, каждый из которых несет неподеленную пару электронов. Одна из этих неподеленных пар атакует атом кислорода в персульфатной связи O–O и разрывает ее.

Продуктами этой реакции являются

1. сульфат-анион; и
2. TEMED, связанный с другим сульфатным анионом через связь N–O.

Эта связь N–O подвергается гомолизу с образованием свободного радикала TEMED и крайне важного сульфатного свободного радикала.

Если вас интересует подробное описание механизма, см. рис. 9.в этой статье Зиминской и др. . [1]

Уведомление о безопасности

TEMED вреден при вдыхании или проглатывании и вызывает коррозию (и пахнет рыбой). Наденьте нитриловые перчатки и не закрывайте бутылку крышкой во время работы.

4. Изопропанол

Зачем он нам нужен?

Удаляет пузырьки из мениска неполимеризованного разделяющего геля, создает плоскую поверхность раздела между разделяющим и укладывающим гелями и предотвращает обезвоживание геля.

Как это работает?

Поверхность раздела двух несмешивающихся жидкостей с наименьшей энергией имеет наименьшую возможную площадь поверхности, то есть идеально плоскую поверхность.

Пузыри могут образовываться только тогда, когда поверхностное натяжение раствора достаточно низкое. Добавление изопропанола к разделяющему гелю увеличивает его поверхностное натяжение за пределы точки, в которой могут образовываться пузырьки.

А вода из рассасывающего геля не может испаряться через слой изопропанола.

Когда все эти ингредиенты объединяются и гель полимеризуется, он приобретает структуру, показанную на рис. 3.

Рисунок 3 . Снимок структуры геля SDS-PAGE. Карбоксамиды (от включения акриламида) или бис-акриламидные поперечные связи встречаются через каждые два атома углерода. (Изображение предоставлено Томасом Уорвиком.)

Устранение неполадок при литье гелей

Хотя литье гелей SDS-PAGE действительно распространено, есть несколько банановых шкур, которые вы можете надеть. Вот некоторые из распространенных проблем и способы их избежать:

Что делать, если мой гель не затвердевает?

Приготовьте свежий 10% APS и перелейте гели. Персульфаты являются нестабильными соединениями из-за слабой связи O–O, которая со временем разрушается.

При этом вы теряете источник свободных радикалов, которые инициируют полимеризацию акриламида.

Вот почему мы обычно храним АПС при температуре –20 °C.

10% APS должен сохраняться до 3 месяцев при 4°C и до 6 месяцев при –20°C.

Обязательно разделите 10% APS на аликвоты ~0,5 мл, чтобы сократить количество циклов замораживания/оттаивания, что ускорит его разложение.

Что делать, если разрешающая способность моего геля неверна?

Что я имею в виду под неправильной разрешающей способностью?

Я просто имею в виду сценарий, в котором вы приготовили, скажем, 20% гель для разделения белка с молекулярной массой 4 кДа, но белок отвалился от конца геля до того, как он отделился от более крупных аналитов.

Если это ты, подготовь свежий АПС и переделай. Еще раз проверьте, правильно ли вы дозировали 30% акриламид.

Дорогая, я уменьшил свой гель

Подготовьте свежие гели и надежно запечатайте их пищевой пленкой во влажной среде. Гели склонны к обезвоживанию, что может привести к их усадке.

Химические вещества в растворе для обесцвечивания, который используется после окрашивания кумасси бриллиантовым синим, также могут вызывать усадку гелей.

Вы можете целенаправленно уменьшать размеры гелей после того, как вы их окрасили, если хотите. Просто не используйте гели, и все это в конечном итоге уменьшится. Это безопасный и удобный способ хранения ваших гелей.

Как остановить вытекание геля до того, как он затвердеет?

Нанесите слой парафильма на нижнюю часть стеклянных многослойных пластин, чтобы герметизировать их. Вы также можете поместить две губки между сэндвич-пластинами и литейным аппаратом вместо одной.

Можно даже взять две губки и обернуть их парафильмом!

Если эти советы не помогли, просто заведите привычку наливать на несколько гелей больше, чем, по вашему мнению, вам понадобится.

Простое подтверждение разрешающей способности любого рецепта геля SDS-PAGE

Собираетесь использовать рецепт геля SDS-PAGE, отличный от представленного здесь? (Я вас прощаю.